Magline® 基因组 DNA纯化试剂盒提取基因组 DNA
时间:2023-07-17 15:07
操作规程
1.取1.5 ml离心管,加入 Affimag磁珠悬液200 μl ,在 Affimag 磁分离架下分离弃去上清,加入200 μl 洗涤液,洗涤1次,弃去上清 。
2.冻存抗凝全血5 ml,37 ℃温育, 4 ℃ 2500 rpm离心10 min ,吸取中间白细胞层至1.5 ml 离心管,加500 μ l生理盐水涡流混匀,4 ℃ 2500 rpm离心10 min,弃上清,重复洗涤一次 。
3.向管中依次加入200 μl 裂解液和经洗涤的Affimag磁珠,涡流混合,室温放置10 min,在 Affimag磁分离架下分离,弃上清液。
4.依次用80 %异丙醇200 μl, 70%乙醇200 μl各洗涤2-3次,室温挥干。
5.加入洗脱液200 μl,涡流混合,室温放置10 min,在Affimag磁分离架下分离,吸取清液,得到DNA溶液。
注意事项
1. Affimag磁珠悬浮在PBS缓冲液中,使用前请充分混合均匀。
2. 本试剂盒应在 4℃冰箱中贮存,到货后六个月内有效。
3. 缓冲液含有刺激性化合物,操作时请戴乳胶手套,避免沾染皮肤和眼睛。
常见问题分析
常见问题 |
可能原因与建议 |
DNA得率较低 |
■ 全血样品中白细胞含量过低,更换新的全血样品; ■ 步骤 2洗涤过程中将白细胞丢失,在规定转速下进行离心; ■ 样品贮存时间过长,使用新鲜的全血样品有助于提高 DNA的收率; ■ 在步骤 4的淋洗过程中将 DNA丢失,小心操作除去异丙醇和乙醇,降低 DNA的损耗。 |
DNA片段降解 |
■ 样品的收集与贮存方法不适合,选择在最佳条件下获得的全血样品 |
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